TUNEL染色實(shí)驗(yàn)

簡(jiǎn)單介紹：

TUNEL染色實(shí)驗(yàn)即原位末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記技術(shù)，是分子生物學(xué)與形態(tài)學(xué)相結(jié)合的研究方法。具體而言，當(dāng)?shù)蛲黾?xì)胞的DNA雙鏈斷裂或一條鏈出現(xiàn)缺口時(shí)，會(huì)產(chǎn)生一系列3’-OH末端。在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶（TdT）的作用下，將脫氧核糖核苷酸和sehngwusu或熒光素（FITC）所形成的衍生物標(biāo)記到DNA的3′末端，從而進(jìn)行凋亡細(xì)胞的檢測(cè)。

基本原理：

其原理是熒光素（fluorescein）標(biāo)記的dUTP在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶（TdT Enzyme）的作用下，可以連接到凋亡細(xì)胞中斷裂DNA的3’-OH末端，并與連接辣根過氧化物酶（HRP，horse-radish peroxidase）的熒光素抗體特異性結(jié)合，后者又與HRP第五二氨基聯(lián)苯胺（DAB）反應(yīng)產(chǎn)生很強(qiáng)的顏色反應(yīng)（呈深棕色），特異準(zhǔn)確地定位正在凋亡的細(xì)胞，因而在光學(xué)顯微鏡下即可觀察凋亡細(xì)胞。由于正常的或正在增值的細(xì)胞幾乎沒有DNA斷裂，因而沒有3’-OH形成，很少能夠被染色。TUNEL細(xì)胞凋亡試劑盒適用于組織樣本（石蠟包埋、冰凍和超薄切片）和細(xì)胞樣本（細(xì)胞涂片）在單細(xì)胞水平上的凋亡原位檢測(cè)。

特點(diǎn)：

 1、高靈敏度：可以在單細(xì)胞水平檢測(cè)到細(xì)胞凋亡，同時(shí)由于凋亡早期就有DNA斷裂，可以檢測(cè)到早期的細(xì)胞凋亡。

 2、特異性好：TUNEL檢測(cè)時(shí)通常更容易標(biāo)記凋亡細(xì)胞，而不容易標(biāo)記壞死細(xì)胞。

 3、快速：實(shí)驗(yàn)流程可以在較短時(shí)間內(nèi)完成。

 4、應(yīng)用范圍廣：可以用于檢測(cè)冷凍或石蠟切片中的細(xì)胞凋亡情況，也可以檢測(cè)培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞的凋亡情況。