IHC免疫組化檢測實驗

免疫組化（Immunohistochemistry，IHC）是利用抗原抗體反應(yīng)，即抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過化學反應(yīng)使標記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色來確定組織細胞內(nèi)抗原（多肽和蛋白質(zhì)），對其進行定位、定性及定量的研究。

*，抗體與抗原之間的結(jié)合具有高度的特異性。免疫組化正是利用這一特性，即先將組織或細胞中的某些化學物質(zhì)提取出來，以其作為抗原或半抗原去免疫小鼠等實驗動物，制備特異性抗體，再用這種抗體）作為抗原去免疫動物制備第二抗體，并用某種酶（常用辣根過氧化物酶）或shengwusu等處理后再與前述抗原成分結(jié)合，將抗原放大，由于抗體與抗原結(jié)合后形成的免疫復(fù)合物是無色的，因此，還必須借助于組織化學方法將抗原抗體反應(yīng)部位顯示出來（常用顯色劑 DAB顯示為棕黃色顆粒）。通過抗原抗體反應(yīng)及呈色反應(yīng)，顯示細胞或組織中的化學成分，在顯微鏡下可清晰看見細胞內(nèi)發(fā)生的抗原抗體反應(yīng)產(chǎn)物，從而能夠在細胞或組織原位確定某些化學成分的分布、含量。組織或細胞中凡是能作抗原或半抗原的物質(zhì)，如蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受體、酶、激素、核酸及病原體等都可用相應(yīng)的特異性抗體進行檢測。

IHC免疫組化檢測實驗所用標本主要有組織標本和細胞標本兩大類，前者包括石蠟切片（病理切片和組織芯片）和冰凍切片，后者包括組織印片、細胞爬片和細胞涂片。其中石蠟切片是制作組織標本基本的方法，對于組織形態(tài)保存好，且能作連續(xù)切片，有利于各種染色對照觀察；還能長期存檔，供回顧性研究；石蠟切片制作過程對組織內(nèi)抗原暴露有一定的影響，但可進行抗原修復(fù)，是免疫組化中的組織標本制作方法。

IHC免疫組化檢測實驗中常用的抗體為單克隆抗體和多克隆抗體，單克隆抗體是一個B淋巴細胞克隆分泌的抗體，應(yīng)用細胞融合雜交瘤技術(shù)免疫動物制備。多克隆抗體是將純化后的抗原直接免疫動物后，從動物血中所獲得的免疫血清，是多個B淋巴細胞克隆所產(chǎn)生的抗體混合物。

免疫組化是一個既簡單又復(fù)雜的實驗技術(shù)：原理很簡單，但是結(jié)果受很多因素如固定時間、固定劑的選擇、抗原修復(fù)方法等影響。所以，要想得到高質(zhì)量的結(jié)果，應(yīng)從取材固定開始避免引入誤差。

免疫組化主要步驟：

5.脫蠟

6.抗原修復(fù)

7.血清封閉

8.加一抗

9.加二抗

10.加SABC

11.加顯色劑

12.復(fù)染

13.脫水

14.封片

服務(wù)內(nèi)容：包含抗體，包埋，切片，染色以及拍照。（每個樣本提供一張照片包含陽性面積）加拍另外計費。